项目名称： 一种基于蛋白质二级结构模块重组建立基因文库的新方法

项目编号： No.31170758

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2012

项目学科： 生物科学

项目作者： 马翠萍

作者单位： 青岛科技大学

项目金额： 55万元

中文摘要： 酶的定向进化是目前蛋白质工程的重要策略之一，它的一个必须的步骤是建立多样性的突变体文库。借用计算机模块组合的思想，本课题拟建立一种基于模块重组构建DNA随机文库的方法。将目标蛋白质的基本二级结构单元（α-螺旋，β-折叠片，β-转角）作为重组的基本模块，在其两端设计编码柔性氨基酸序列的共用接头序列，利用共用接头的互补连接，用重聚PCR的方法将标准模块进行随机组合，得到一个多样化的DNA文库。为便于筛选，拟以卡那霉素抗性基因的二级结构单元作为模块进行重组建立突变体文库，利用进行抗性筛选来进行方法的检验。本方法的建立克服了目前突变体文库建立方法中点突变多，缺乏序列多样化组合的弊端，可以开拓目标基因更为广阔的序列空间。另外，基于出发点基因的二级结构单元作为重组的基本模块进行DNA序列的组合，所建基因文库中形成有功能突变体的几率较高，在筛选时会有更好的针对性和成功率，提高了筛选的成功率。

中文关键词： 定向进化；DNA重组；突变体文库；二级结构；核酸扩增

英文摘要：

英文关键词： Directed evolution；DNA reassembly；Mutant library；Secondary structure；Nucleic acid amplification